Випробовувані розчини готують додаванням відповідних кількостей основних розчинів випробовуваної речовини до розбавляючої води, щоб отримати потрібну конлой або деіонізованій воді, рекомендується додавати не більш Lu0 мл основних розчинів на 10 мл розбавляючої води.

Прилади і устаткування

Всі матеріали, дотичні з рідиною, в якій повинні поміщатися випробовувані організми, повинні бути хімічно інертні і не повинні поглинати досліджувану речовину.

Використовують звичайне лабораторне устаткування (включаючи для кожної контрольної судини занурену мережу, зроблену з нейлону або іншого хімічно інертного матеріалу).

Судини для випробування повинні мати достатню місткість (не менше 1 л на 1,5 г риби). Якщо застосовують летючі випробовувані речовини, судини повинні мати кришки.

Перед використанням вони повинні бути ретельно вимиті, а потім обполоснули водою або розбавляючою водою. Після закінчення випробування судини треба звільнити, очистити відповідним способом, обполоснути водою, висушити, а потім остаточно обполоснути водою. Судини слід обполоснути водою безпосередньо перед вживанням.

Устаткування для контролю температури. Температура досліджуваних розчинів і води в резервуарах повинна бути відрегульована до 23+гс відповідним методом.

Навколишнє середовище

Приготування і зберігання розчинів, зміст риб, всі операції і випробування виконують в приміщенні з атмосферою, що не містить шкідливих концентрацій пари. Слід уникати будь-яких дій, які можуть змінити поведінку риб. Всі випробування потрібно виконувати при нормальному лабораторному освітленні, відповідному денному, в період від 12 до 16 ч.

Методика випробування

Стан риб. Коли змінюється основна популяція, слід виконувати токсикологічне випробування із застосуванням методу, описаного в ІСО 7346-1, використовуючи відповідні дані і початкову речовину. Результати таких випробувань повинні в певних межах співпадати з результатами, отриманими раніше в цій же лабораторії.

Вираз результатів

Результати випробування вважатимуться достовірними, якщо виконані наступні вимоги:

а) зміряна в будь-якій судині в ході випробування концентрація розчиненого кисню складає не менше 60% від величини повного насичення;

б) відсутність значного зменшення концентрацій досліджуваної речовини під час випробування;

в) смертність контрольних риб не повинна перевищувати 10%;

г) кількість контрольних риб з неприродною поведінкою не повинна перевищувати 10%;

д) 24 ч - Lc50 згаданої речовини для риб повинна відповідати раніше отриманим даною лабораторією результатам;

Підрахунок Lc50. Там, де простій графічний підрахунок Lc50 вважається адекватним, він може бути отриманий шляхом побудови графіка смертності (вираженого як відсоток випробовуваної риби в кожній судині) щодо концентрації досліджуваної речовини. Використання осі з лінійними шкалами дозволить побудувати

сигмоїдальну залежність, з якої можна отримати Lc50 інтерполяцією концентрацій, які викликають 5% смертності (див. мал. 11.1). Краще всього наносити дані на міліметрівку, що має осі і логарифмічні шкали. Дані, нанесені таким чином, повинні утворити лінійну залежність, з якої можна інтерполювати Lc50.

Там, де потрібно обчислити нахил кривої при 95%-ной довірчої вірогідності і Lc50, дані можна аналізувати графічно.

Рекомендується використання обчислювального устаткування.

Якщо даних для обчислення 24 ч - Lc50; 48 ч - Lc50; 72 ч - Lc50 і 96 ч -LC50 недостатньо, записують мінімальну концентрацію, при якій смертність складає 100%, і максимальну концентрацію, при якій смертність складає 0% через 24; 48; 72 і 96 ч. Ці концентрації визначають межі, в яких, можливо, знаходиться Lc50.

Звіт про випробування

Звіт про випробування повинен містити наступну інформацію:

а) хімічну ідентифікацію і будь-яку інформацію про досліджувану речовину;

б) метод приготування розбавляючої води, основних і випробувальних розчинів;

в) всі біологічні, хімічні і фізичні дані, що мають відношення до випробування, але не визначені в цій частині ІСО 7346, включаючи умови акліматизації випробовуваних риб і щільність посадки риби, в г/л;

г) дані, які враховують при оцінці правильності випробування:

1) концентрація розчиненого кисню;

2) смертність, спостережувана серед контрольних риб;

3) число контрольних риб, що показує аномальну поведінку;

4) Lc50 еталонної речовини;

д) дані хімічного аналізу випробовуваної речовини в судинах, якщо такі є, і загальну процентну смертність в кожних 24, 48 ч і, якщо можливо, 72 і 96 ч після початку випробування.

Lc50 (логарифмічна

і імовірнісна залежність)

(якщо вони є) через 24, 48 ч і, якщо можливо, 72 і 96 ч; сюди слід включити дані про метод обчислення і методи хімічних аналізів, там де вони застосовуються;

ж) нахил кривої «концентрація - реакція» (при її 95%-ной довірчої вірогідності, якщо така є);

з) графічне зображення взаємозв'язку концентрації і чутливості реакції;

и) незвичайні реакції риб у випробовуваних умовах і явно виражені зовнішні ефекти, викликані випробовуваною речовиною;

к) будь-які відхилення від процедури випробування і їх обгрунтування; л) посилання на міжнародний стандарт ІСО 7346-1.

Частина 2 ІСО 7346 встановлює напівстатичний метод визначення гострої летальної токсичності речовин, розчинених у воді, за певних умов для прісноводих риб .

Результати самі по собі не достатні, щоб встановити стандарти якості води для охорони навколишнього середовища.

Метод застосовують з метою визначення для кожної досліджуваної речовини основних категорій гострої летальної токсичності на прісноводних рибах.

Метод може бути застосований для інших прісноводих, солоновато-водных і морських риб як випробовуваних організмів з відповідними змінами умов випробування, особливо кількості і якості розбавляючої води і температури.

ВИЗНАЧЕННЯ ТРИВАЛОЇ ТОКСИЧНОСТІ

ІСО 10229 встановлює метод визначення тривалої токсичності речовин на