Метод випробувань по ІСО 10229 дає можливість вибору між напівстатичним і проточним методами (див. ІСО 7346-2 і ІСО 7346-3). Метод застосовують з метою визначення для кожної випробовуваної речовини (окремі хімікати, їх суміші, стічні води промислових виробництв і тому подібне) тривалої сублетальної токсичності на струмковій форелі в умовах випробування. Результати випробування самі по собі недостатні для встановлення стандартів якості води для охорони навколишнього середовища.

Суть методу полягає у визначенні за заданих умов концентрацій речовин, які статистично значно знижують темпи зростання випробовуваної популяції струмкової форелі після витримки 14 і 28 днів.

Випробування проводять в два етапи:

а) попереднє випробування (див. ІСО 7346-2 і ІСО 7346-3), при якому визначають концентрації речовин, летальні для 50% випробовуваної популяції при експонуванні протягом 96 г (96 г Lc50);

б) остаточне випробування з використанням 16 риб на одну концентрацію, результати якого реєструють як найменшу спостережувану ефективну концентрацію (LOEC), так і спостережену ефективну концентрацію (NOEC). Їх значення приводять з вказівкою періоду експонування, наприклад, 28 д LOEC

Там, де явні ознаки указують на те, що випробовувані концентрації залишаються відносно постійними (наприклад, в межах 20% від номінальних величин) під час випробування, можна використовувати або зміряні, або номінальні концентрації при розрахунку LOEC і NOEC.

постійними (±20% від середніх), але менше 80% або більше 120% від номінальних значень, при розрахунку LOEC і NOEC використовують дані хімічного аналізу. Якщо відсутні ознаки того, що досліджувані концентрації залишаються на прийнятному рівні, або відомо (або передбачається), що концентрації досліджуваних реактивів значно змінилися на якій-небудь стадії під час досліджень, то незалежно від того, є чи ні дані хімічного аналізу, LOEC і NOEC визначити не можна, використовуючи цей метод. В цьому випадку результати випробування не пропадають, але при цьому можна стверджувати, що величини LOEC і NOEC менше або рівні номінально використаних концентрацій.

Реактиви і випробовувані організми

Вимоги до реактивів, основному, випробовуваному розчинам і розбавляючій воді (рн води може лежати в межах 6,7-8,5, але його коливання не більш ±0,2) - див. метод визначення гострої летальної токсичності.

Випробовуваним організмом є струмкова форель. Риби вибирають з одного косяка і до випробувань їх витримують для акліматизації не менше 2 тижнів. Риби повинні знаходитися в нормальних умовах, їх годують при мінімальній нормі 1% кормів від ваги мокрого тіла в день при акліматизації і 4% кормів - під час випробування. Корм для риб, що є сухим кормом на основі мальків сальмоніда, розділяють на дві рівні частини і дають рибам двічі в день (проміжок між годуванням не менше 5 ч).

На початку випробування кожна риба повинна мати масу не менше 3 г і не більше 5 р. Риби не повинні мати потворних форм і хвороб. Вони не повинні піддаватися лікуванню під час випробування або за два тижні, передуючі випробуванню. Умови змісту струмкової форелі детально описані в довідниках по розведенню риб.

Устаткування

Вимоги до устаткування - див. метод визначення гострої летальної токсичності.

Випробувальні судини повинні мати місткість не менше 40 л, їх стінки повинні бути непрозорими, щоб не турбувати риб.

Навколишнє середовище

Див. метод визначення гострої летальної токсичності. Методика випробування

Перед випробуванням риб клеймлять. Наприклад, беруть неіржавіючий дріт, згинають з нього арабські цифри і кріплять їх до пласті риб. Клейма із замкнутими петлями (як цифри 0, 6, 8, 9) не ставлять, оскільки вони можуть привести до зараження шкіри.

Попереднє випробування

Проводять по методиці ІСО 7346-2 або ІСО 7346-3 для визначення 96 ч Lc50.

Остаточне випробування

Вибирають не менше п'яти концентрацій, значення яких утворюють прогресію. Найвищі концентрації не повинні зазвичай бути менше 10% або більше 32% від 96 ч Lc50. В деяких випадках може потрібно вужчий діапазон концентрацій, а для інших випадків ширший діапазон концентрацій, щоб отримати потрібні дані.

Беруть 6 сорокалітрових судин і заповнюють 5 судин випробовуваними розчинами, а один заповнюють розбавляючою водою і використовують його як контрольного. Якщо для розчинення або діспергациі випробовуваної речовини застосовують органічний розчинник, готують ще одну контрольну судину з водою і розчинником. Концентрація розчинника повинна бути рівна максимальній його концентрації в будь-якій з судин з випробовуваними розчинами. Встановлюють в судинах температуру в діапазоні 12,5-17,5°с і підтримують її з точністю ±ГС.

Вимірюють концентрацію випробовуваної речовини в розчинах по наступній зразковій схемі:

-4 Початок дозування випробовуваної речовини у використаних

судинах -3 Проба 1

-2 Проба 2

0 Якщо проби 1 і 2 вважаються задовільними

клеймлять рибу і починають випробування

0-7 Проба 3

8-14 Проба 4

15-21 Проба 5

22-28 Проба 6

Режим випробування встановлюють відповідно до програми, наприклад: безперервно проводять заміну випробовуваного розчину із швидкістю зразкового 200 л/день або замінюють розчин шляхом додавання свіжого через короткі проміжки часу. Концентрація розчиненого кисню в розчині не повинна бути нижче 70% від рівня насичення.

В процесі випробування визначають зміну темпів зростання окремих риб або зміну темпів зростання кожної групи риб.

Вираз результатів

Результати випробування вважатимуться правильними, якщо виконані наступні вимоги:

а) концентрація розчиненого кисню у випробувальних розчинах під час випробування не опускається нижче 70% від рівня насичення;

б) температура розчину була в діапазоні 12,5-17,5°с і не відхилялася більш ніж на 2°;

в) концентрація випробовуваних речовин залишалася в межах ±20% від