і позначають їх 0(1), А(ІІ), В(ІІІ) У відповідний сектор тарілки за допомогою піпетки нано-сять велику краплю сироватки двох серій — 0(1), А(ІІ), В(ІІІ) груп По-душечку пальця пацієнта обробляють спиртом і проколюють шкіру скари-фікатором Першу краплю крові знімають марлевою кулькою, наступні — різними кутками предметного скельця наносять послідовно в краплю сиро-ватки і ретельно розмішують Крапля крові, що наноситься, має бути в 5—10 разів меншою від краплі сироватки. Потім шляхом погойдування та-рілки ретельно перемішують кров із сироваткою. Спочатку оцінюють ре-зультат реакції через 3 хв, після чого додають краплю ізотонічного розчи-ну натрію хлориду, знову змішують шляхом погойдування тарілки і через 5 хв проводять кінцеву оцінку реакції аглютинації Якщо реакція ізогемаглютинації позитивна, склеєні пластівці еритроцитів не розділяються в разі додавання ізотонічного розчину натрію хлориду і перемішування Як-що реакція негативна, краплі сироватки прозорі, пластівці еритроцитів відсутні Якщо сироватки 0(1), А(ІІ), В(ІІІ) груп крові дають позитивну реакцію в обох сироватках, кров належить до AB(IV) групи. Тоді необхідно провести реакцію аглютинації зі стандартною сироваткою AB(IV) групи за такою самою методикою. Якщо всі 3 сироватки в обох серіях не дають реак-ції аглютинації, досліджувана кров є 0(1) групи Якщо реакція ізогемаглютинації негативна із сироваткою А(ІІ) групи обох серій і позитивна із сиро-ваткою 0(1) і В(ІІІ) груп, досліджувана кров є А(ІІ) групи. У разі позитив-ної реакції ізогемаглютинації із сироваткою 0(1) і А(ІІ) груп і негативної із сироваткою В(ІІІ), в обох серіях кров є В(ІІІ) групи (мал. 1).
Поява інших комбінацій є помилковою, тому визначення групи крові слід повторити. Групу крові і резус-належність вносять в історію хвороби і в пас-порт, указуючи дату, проведене дослідження підтверджують підписом лікаря
Визначення групи крові за стандартними відмитими еритроцитами
Кров хворого в кількості 3—6 мл центрифугують. На тарілку, розділе-ну на 4 сектори, наносять по краплі сироватки, яка змішується зі стан-дартними еритроцитами 5:1. Краплі перемішують скляною паличкою, по-гойдуючи тарілку протягом 3 хв. Потім додають по краплі ізотонічний розчин натрію хлориду, продовжуючи змішування погойдуванням ще 5 хв Результат оцінюють таким чином.
за відсутності аглютинації з еритроцитами 0(1) групи крові і наявності її в А(ІІ) і В(ІІІ) групах кров оцінюють як 0(1) групи;
за відсутності аглютинації з еритроцитами 0(1) і А(ІІ) груп крові і на-явності її в В(ІІІ) групі кров оцінюють як А(ІІ) групи;
за відсутності аглютинації з еритроцитами 0(1) і В(ІІІ) груп крові і на-явності її в А(ІІ) групі кров оцінюють як В(ІІІ) групи;
за відсутності аглютинації з еритроцитами в усіх трьох групах крові 0(1), А(ІІ), В(ІІІ) кров оцінюють як AB(IV) групи
Мал. 1. Визначення групи крові за системою АВО
Визначення групи крові за допомогою цоліклонів антигенів А і В
Цоліклони антигенів А і В є продуктом гібридомних клітинних ліній, отриманих унаслідок злиття мишачих антитілоутворюючих В-лімфоцитів з клітинами мишачої мієломи.
Цоліклони антигенів і розведена асцитна речовина мишей-носіїв відпо-відної гібридоми, в якій містяться специфічні імуноглобуліни класу IgM, спрямовані проти групоспецифічних антигенів А чи В людини.
Цоліклон не має антитіл іншої специфічності і тому не спричинює нес-пецифічної аглютинації еритроцитів.
Цоліклони антигенів А і В випускають у ліофілізованій формі в ампу-лах, у яких крім реагентів вміщується також консервант (натрію азид) і відповідний барвник. До кожної ампули цоліклону додається ампула роз-чинника (ідентичного для обох реагентів).
Цоліклон антигену А (рожевого кольору) і антигену В (синього кольо-ру) випускають в ампулах по 20, 50, 100 і 200 доз із розчинником також в ампулах по 2, 5, 10 і 20 мл відповідно. Термін зберігання 3 роки в хо-лодильниках за температури +2 ... +8 °С, в темному місці — за темпера-тури +10 ... +25 °С і відносної вологості повітря 65—15 % протягом 2 ро-ків.
Техніка визначення групи крові людини системи АВО
Розкрити ампулу цоліклону антигенів А і В і 2 ампули з розчинником. За допомогою окремих чистих піпеток розчинники перенести у відповідні ампули. Кожну ампулу струсити кілька разів. Повне розчинення настає протягом 1—2 хв.
Поряд з краплями антитіл на пластинку наносять по одній невеличкій краплі крові, приблизно в 10 разів меншій від краплі антитіл (0,01). Кра-плі змішують скляною паличкою. Якщо результат позитивний, відбуваєть-ся аглютинація еритроцитів у вигляді маленьких червоних агрегатів. Аг-лютинація відбувається протягом 1—2 хв.
Оцінка результатів
Аглютинація відсутня з цоліклоном антигену А, з цоліклоном антигену В. Це означає, що в еритроцитах відсутні антигени А і В, кров належить до групи 0(1) (мал. 2).
Аглютинація (+) спостерігається тільки із цоліклоном антигену А. Кров належить до групи А(ІІ).
Мал. 2. Визначення групи крові за допомогою моноклональних сироваток
Аглютинація спостерігається із цоліклонами антигенів А і В. Це кров групи AB(IV).
Для виключення автоаглютинації, котра може бути в деяких хворих (мієломна хвороба, опіки), а також під час дослідження пуповинної крові немовлят, при аглютинації еритроцитів із цоліклонами антигенів А і В не-обхідно провести контроль з ізотонічним розчином натрію хлориду.
ПОМИЛКИ ПІД ЧАС ВИЗНАЧЕННЯ ГРУП КРОВІ
Встановлення аглютинації там, де її немає. Це зумовлено підсихан-ням суміші сироваток з кров'ю, виникненням псевдоаглютинації за низької температури в приміщенні (+15 °С і нижче);
непомічена аглютинація там, де вона має бути. Подібна помилка мо-жлива, якщо низький титр або слабка активність стандартних сироваток, якщо взято надто велику краплю крові, у разі недостатнього часу спосте-реження, сповільненої реакції аглютинації, високої температури навколиш-нього середовища (+28 ... +30 °С).
Для запобігання помилкам у всіх непевних ситуаціях необхідно прове-сти повторне дослідження групової належності зі свіжими стандартними сироватками або