У наших дослідженнях у клітинах ЛЕТ, оброблених Протефлазідом і заражених вірусом герпесу, не встановлено достовірного збільшення числа аберантних метафаз, що свідчить про захисну дію досліджуваного препарату.

Вивчення антигерпетичної активності Протефлазіду в експериментах in vivo

Антигерпетичну активність (ВПГ-1) препарату Протефлазід вивчали на моделі герпесвірусного менінгоенцефаліта в білих безпородних мишей. Препарати вводили по 0.25 мл per os по таких схемах:

до інфікування і щодня протягом 3 діб - профілактична схема введення;

через 24 години після зараження вірусом герпесу - лікувальна схема.

Кожен дослід складався з чотирьох груп тварин:

миші, яким уводили Протефлазід у концентрації 0.340 мкг/кг + вірус герпесу;

миші, яким уводили Протефлазід у концентрації 0.068 мкг/кг + вірус герпесу;

миші, яким уводили віролекс + вірус герпесу;

миші, яким уводили фізіологічний розчин + вірус герпесу.

Оцінку активності препаратів проводили шляхом порівняння летальності в досвідченій і контрольній групах. При цьому враховували:

відсоток летальності тварин;

кратність захисту (КЗ) - кратність зменшення кількості загиблих мишей у дослідній групі в порівнянні з контрольною;

індекс ефективності (ІЕ) препарату визначали по формулі:

кратність захисту - 1

ІЕ = ------------------------------- х 100

кратність захисту

Перша схема дослідження включала вивчення активності Протефлазіду під час профілактичного введення в дозі 6.8 мкг/мл. Результати приведені в таблиці 9.

Таблиця 9. Протективна дія препарату Протефлазід при профілактичному введенні на моделі герпесвірусного менінгоенцефаліту в мишей

Препарат Доза, мг/кг К-сть мишей З них загинуло КЗ ІЄ Інгіб. інф. титр в тканині мозку мишей

всего %

Протефлазід 0.340 10 8 80 1.25 37.5 1.5

Протефлазід 0.068 10 5 50 2.0 50.0 3.0

Віролекс 100 10 7 70 1.4 28.0 2.5

Плацебо 10 10 100 - -

На підставі даних, приведених у таблиці 9, можна зробити висновок, що препарат Протефлазід володіє вираженою профілактичною дією в дозі 0.068 мг/мл.

У наступній серії дослідів Протефлазід і віролекс уводили мишам через 24 години після зараження їх вірусом герпесу - лікувальна схема. Результати приведені в таблиці 10.

Таблиця 10. Захисна дія Протефлазіду при лікувальній схемі введення мишам, зараженим вірусом герпесу

Препарат Доза, мг/кг К-сть мишей З них загинуло КЗ ІЄ Інгіб. інф. титр в тканині мозку мишей

загалом %

Протефлазід 0.340 12 8 66.6 1.5 33.3 1.5

Протефлазід 0.068 10 7 30.0 1.43 30.0 1.5

Віролекс 100 12 7 58.3 1.7 41.17 2.5

Плацебо 10 10 100 - -

З приведених даних у таблиці 10 можна зробити висновок, що Протефлазід виявляє лікувальну дію, тому що ІЕ - 30.0 і вище, є показником противогерпетичної активності in vivo на моделі менінгоенцефалиту.

Вивчення впливу Протефлазіду на хромосоми клітин кісткового мозку мишей, заражених вірусом герпесу

Наступним етапом роботи було вивчення впливу Протефлазіду на хромосоми клітин кісткового мозку мишей, заражених вірусом герпесу.

Антивірусні властивості препарату Протефлазід були вивчені в експериментах in vivo на білих безпородних мишах. Препарат вводили в дозі 0.34 мг/кг per os, внутрімозкове зараження вірусом герпесу здійснювали за добу до введення препарату (лікувальна дія) і через добу після введення препарату (профілактична дія). У кожній групі тварин було по 5 особин.

1 група - негативний контроль (інтактні миші),

2 група - мишей заражали вірусом герпесу,

3 група - мишам уводили препарат у концентрації 0.34 мг/кг, через 24 години заражали вірусом герпесу - профілактика,

4 група - мишей заражали вірусом герпесу і через 24 години вводили препарат у дозі 0.34 мг/кг - лікування.

Приготовлені по 2 стекла від кожної тварини, усього в кожній групі проаналізоване по 500 метафазних пластинок. Результати представлені в таблиці 11.

Таблиця 11. Цитогенетичну активність Протефлазіда в клітинах кісткового мозку білих безпородних мишей

Умови експерименту К-сть мышей К-сть клеток Кількість аберацій Множабер. к-сть Пробіли, к-кість Частка зруйнованих клітин %

Один. фрагм Пар-ні фрагм Обміни

Вірус герпеса 5 500 21 15 5 10 38 89

19.8+1.7

Вірус герпеса + Протефлазід профілактика 5 500 8 1 0 0 19 28

5.6+1.0

Вірус герпеса + Протефлазід лікування 5 500 11 5 3 5 41 65

13.0+1.5

Інтактні миші 5 500 6 0 0 0 9 15

3.0+0.7

Протефлазід однократне введення 5 500 6 0 0 0 10 16

3.2+0.7

Як видно з представленої таблиці 11, при профілактичному введенні Протефлазіду мишам, зараженим вірусом герпесу, рівень аберантных метафаз склав 5.6±1.0 %, при зараженні мишей вірусом герпесу цей показник дорівнював 19.8±1.7%, (вірогідність розходжень склала t =7.3), у той же час при лікувальній схемі досліду число метафаз з порушеннями хромосом дорівнювало 13.0±1.5 %, вірогідність розходжень з даними, отриманими в групі тварин, заражених вірусом герпесу, склала t = 3.0.

У таблиці 12 представлені дані по розподілу типів ушкоджень хромосом при профілактичній і лікувальній схемі введення Протефлазіду мишам, зараженим вірусом герпесу.

Таблиця 12. Типи ушкоджень хромосом у клітинах кісткового мозку мишей при профілактичній і лікувальній схемі введення Протефлазіду мишам, зараженим вірусом герпесу

Умови експерименту Типи аберацій хромосом

Хромосомні Хроматидні

Вірус герпеса 33.7±2.1 66.3±2.1

Вірус герпеса + Протефлазід (профілактика) 3.5±0.8 96.5±0.8

Вірус герпеса + Протефлазід (лікування) 20.0±1.7 80.0±1.7

Інтактні миши 0 100.0

Протефлазід (1-кратне введення) 0 100.0

З представленої таблиці 12 видно, що частка аберацій хроматидного типу (одиночні розриви і пробіли) у всіх групах переважала. Перевага аберацій хроматидного типу дає підставу зробити висновок про те, що ушкодження хромосом відбувається в періоді S чи G2 клітинного циклу, що є додатковим підтвердженням дії вірусу герпесу на хромосоми по типу локальних інгібіторів синтезу ДНК [14]. При цьому слід зазначити, що Протефлазід значно знижував рівень аберацій хромосомного типу як при