Вивчення впливу Протефлазіду на моделі статевого герпесу

Антивірусну активність розчину Протефлазіду різних концентрацій субстанції досліджували на моделі генітального герпесу в морських свинок. Лікування з використанням розчину Протефлазіду і віролексу починали через 24 години після інфікування. Усього в досліді було 5 груп тварин:

тварини, яких заражали тільки вірусом герпесу;

тварини, яких заражали вірусом герпесу і лікували віролексом;

тварини, яких заражали вірусом герпесу і лікували розчином Протефлазіду у концентрації 6.8 мкг/мл;

тварини, яких заражали вірусом герпесу і лікували розчином Протефлазіду у дозі 1.36 мкг/мл;

тварини, яких заражали вірусом герпесу і лікували розчином Протефлазіду у дозі 0.68 мкг/мл.

При дослідженні ефективності розчину Протефлазіду на моделі генітального герпесу в морських свинок були отримані наступні дані (таблиця 13).

Таблиця 13. Ефективність розчину Протефлазіду на моделі генітального герпесу в морських свинок

Групи тварин Препарат мкг/мл Тривалість захворюваня доба р СІВЗ, бали ІЛД %

1 контроль зараження 15 ± 3.2 51.0

2 віролекс 9.75 ± 2.86 <0,05 22.0 56.0

3 Протефлазід 0.68 12.5 ± 1.39 >0.05 28.5 40.0

4 Протефлазід 1.36 9.0 ± 1.39 <0.05 20.2 60.0

5 Протефлазід 6.8 5.0 ± 0.5 <0.05 5.0 95.0

Було показано, що використання розчину Протефлазіду у концентрації 0.68 мкг/мл 1 раз у добу протягом 3 днів знижувала виразність симптоматики до 28.5 балів, що відповідає терапевтичному ефекту на рівні 40 % (р<0.05), однак вірогідно не скорочувало тривалості захворювання.

Збільшення концентрації препарату Протефлазід до 1.36 мкг/мл привело до зниження симптоматики до рівня 20 балів, терапевтичний ефект склав - 60 %, тривалість захворювання у тварин склала 9 днів, що статистично вірогідно по всіх параметрах і вказує на ефективність препарату в даній дозі.

При використанні розчину Протефлазіду у концентрації 6.8 мкг/мл 1 раз у добу протягом 3 днів, виразність симптоматики була незначною - 5 балів: ледь помітна гіперемія в місці скарифікації і внесення вірусу, без набряків і орхіту. Тривалість гіперемії склала 5 діб, терапевтичний ефект - 95 %.

Таким чином, у серії експериментів показано, що Протефлазід у концентрації 1.36 мкг/мл виявив виражену антивірусну дію, а в концентрації 6.8 мкг/мл - майже цілком запобіг виникненню специфічної симптоматики.

Вивчення впливу Протефлазіду на моделі герпетичного кератиту в кролів

Наступним розділом роботи було вивчення ефективності Протефлазіду на моделі герпетичного кератиту кроликів. Результати вивчення ефективності Протефлазіду на моделі герпетичного кератиту кроликів представлені в таблиці 14.

Таблиця 14. Ефективність Протефлазіду на моделі кератиту ока кролів

Груп. тварин Препарат мкг/мл Тривалість захворювання (дні) Початок прояви захворювання (час) Ступінь прояву

1 Плацебо 17 48 пухирці впродовж насічок, 3-5 ерозій гіперемія

2 Протефлазід 6.8 9 72 пухирці впродовж насічок, 2 ерозії гіперемія

3 Протефлазід 0.68 0 - -

Згідно представлених даних, обробка Протефлазідом у концентрації 0.68 мкг/мл цілком запобігала розвитку кератиту в кроликів, застосування розчину Протефлазіду в концентрації 6.8 мкг/мл зменшувало тривалість плину, трохи подовжуючи терміни первинних проявів захворювання і виразність прояву інфекційного процесу.

Вивчення проти-ВІЧ активності препарату Протефлазід

Для оцінки противірусної активності досліджуваного препарату рослинного походження була використана традиційна модель первинно - інфікованих клітин МТ-4. Варто врахувати, що робота з ВІЧ вимагає дотримання особливих правил її виконання, що припускають забезпечення високого ступеня захисту і кваліфікації працюючого персоналу. Дослідження проводилися в спеціально обладнаних приміщеннях із залученням відповідного устаткування.

Штам ВІЧ-1, що використаний у роботі, був отриманий з Інституту вірусології ім. Д.І. Іванівського Російської АМН у 1997 році.

Інфікування клітин МТ-4 штамом ВІЧ-1 проводили додаванням вірусу до клітинної суспензії з концентрацією 2х10·6 клітин/мл і множинністю зараження 1.0 lg ID 50.

Інгібіруючий ефект препарату оцінювався на 5-у добу культивування по кількості вірусного антигену имуноферментними методами (тест система HIV Monoclonal фірми Еббот, США). Крім цього проводився облік значення по інфекційному титру ВІЧ.

Дослідження проводили з застосуванням препарату і при контролі на ВІЧ без препарату. Як досліджувані концентрації Протефлазіду, внесеного в лунки використовували 1.1 % 1.0 % і нативний препарат у дозі 5 мкл на одну лунку. Результати експериментального вивчення проти-ВІЧ активності Протефлазіду приведені в таблиці 15.

Таблиця 15. Вплив Протефлазіду на репродукцію ВІЧ у культурі клітин МТ - 4.

Умови досліду Експресія ВІЧ, титри р24 ВІЧ-1, мкг/мл Інфекційний титр в lg ID50

Дія Протефлазиду 45 2.0

Контроль на ВІЧ 140 5.0

У результаті проведених досліджень експериментально було показано, що препарат рослинного походження - Протефлазід вірогідно інгібірує репродукцію вірусу імунодефіциту людини в досліджуваних дозах. Це виявляється як відображення інгібіції експресії антигену р24 ВІЧ-1, так і на достовірному зниженні інфекційного титру на 3.0 і 4.0 lg ID50.

Механізми дії Протефлазіду

Інтерфероногенна активність препарату в культурі лейкоцитів.

Препарат Протефлазід у різних дозах додавали до 3 млн лейкоцитів донорів людини і культивували при 37о С на протязі 24 годин. Через 24 години надосадову рідину збирали і доводили її рН до 2.0, залишали при 4о на 48-72 години, потім рН рідини відновлювали до 7.3 і в ній визначали рівень інтерферону за відомою методикою придушення ЦПД вірусу везикулярного стоматиту в культурі клітин, що перевиваються, МДВК. Результати приведені в таблиці 16.

Таблиця 16. Рівень інтерферону, продукуємий Протефлазідом у культурі лейкоцитів людини

Протефлазід в дозах, мкг/мл Активність ІФН, МЕ 50/мл

6.8 1280

3.4 640

1.7 640

0.85 320

0.68 320

0.068 80

Поли{И}:поли{Ц}*