Ці етапи згортання крові можна подати схематично так :

Ушкоджувальний фактор

1.Тромбоцити -------------------------------------------------> Тромбопластин

Тромбопластин

2. Протромбін ------------------------------------------------> Тромбін

Ca 2+

Тромбін

3. Фібриноген -------------------------------------------------> Фібрин

Ca2+

РОЗДІЛ ІІ

МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

2.1. ЗАБІР ТА ОБРОБКА КРОВІ

Перед взяттям крові у хворого повинні бути приготовлені всі необхідні інструменти ( шприци , голки ,секундомір) і пробірки. Для зменшення контактної активації гемостазу рекомендуються силікону вати голки,шприци……, пробірки.[15,20].

Для одного хворого готують 1-2 пробірки діаметром 0,8-1,0 см і висота 8-10 см, для дослідження крові часу згортання крові по Лі- Уайту;1-2 мірні центрифужні пробірки з антикоагулянтом.В якості антикоагулянта використовую 3,8 % розчин трьохзаміщеного цитрату натрію.Цей розчин забезпечує велику стабільність згортання крові.Але можна також використовувати 1,34% розчин оксалата натрію.Кров змішую з антикоагулянтом в співвідношені 9: 1, прицьому антикоагулянт набираю в мірну пробірку по 1,0мл , а кров до мітки 10мл.Така кількість крові достатня для постановки повного дослідження тестів коагулограми.Кров у хворого при повному обстеженні береться натще.В локтьову вену вводять суху зх широким просвытом голку , бажано без шприца, для того що набрати кров в пробірку самотьоком.Перші декілька капель крові , вміст яких може вміщувати в собі тканинний тромбоапластин, із травмованих шкіри та судинної стінки,відкидають потім набирають кров в пробірку 1,0 мл для визначення часу згортання крові по Лі-Уату і зразу ж вкючають секундомір.Після чого набирають кров в марну пробірку з антикоагулянтом ( 9мл ) до мітки 10.Пробірку закриваю протертою пробкою і декілька раз перевертаю для змішування крові з антикоагулянтом.Кров дослыджуэться в день забору не пізніше 4 год. Після.Невелшику кількість цільної крові ( 0,3-0,5 мл) відливаю в окрему пробірку для постановки ауто коагуляційного тесту.Плазму крові центрифугую для отримання плазми.В роботі використовується плазма багата та бідна на тромбоцитиє.Для отримання плазми крові , багатої тромбоцитами, центрифугування проводять при 1000-1500 об/хв.,протягом 5хв.Із неї додатковим центрифугуванням при 3000-4000 об/хв., рпотягом 10хв. Можна отримати плазми бідну тромбоцитами.Плазма рколві не повинна мати слідів гемолізу і еритроцитів , в противному випадку вона не годиться для дослідження.[16,18,19].

Для кількісного визначення тромбоцитів ми беремо кров із пальця. Для цього моє робоче місце має бути вже підготовлене: пробірки, скельця, скарифікатори, вата, спирт, капіляри.

Кров безпосередньо беру із кінчика пальця.На сухий палець, оброблений для взяття крові , наносять одну каплю 14%

Магнезії, там і проколюю палець через цю каплю.Капля яка виступила змішую з каплею сірчаної магнезії , яка знаходиться на пальці.Із приставленої до предметного скла каплі роблю тоненькі мазочоки, смушу їх на повітрі , фіксую і фарбую як звичайні препарати крові.Пофарбований і висушений мазок досліджую при імерсійній системі мікроскопа.Фарбую мазок 45 хв за Нохтом ( 5 частина розчину азуру ІІ, одна частина еозину, 5 частина води ).[13,18].

Для дослідження адгезивно-агрегаційної функції тромбоцитів кров береться із кубітальної вени ступні , підраховується кількість агрегатів з тестових еритроцитів в каплі сиворотки хворого в одному полі зору , а також в одному агрегаті – середню їх кількість в у всіх титрах розведення сиворотки крові

Вказвних кінцівок та тромбоцитів.У пофарбованих мазках крові за Фоніо досліджують форму , структуру та розміри тромбоцитів за допомогою окуляр-мікрометра,за даними досліджень , за структурою тромбоцитів розрізняють : юні, зрілі та старі форми [ 15,16 ].

2.2.Основні методи дослідження.

Основними методами лабораторного дослідження тромбоцитарної ланки гемостазу є:

-визначення кількості тромбоцитів в крові чи плазмі;

-визначення індексу антиагрегаційної активності тромбоцитів ;

-визначення агрегаційної здатності тромбоцитів;

-дослідження агрегаційної активності тромбоцитів фотометричним методом;

-визначення активності факторів ІІІ,І\/ тромбоцитів;

-визначення рефракції кров’яного згустка;

-визначення показників

тромбоеластограми, коагулограми, фібринолізу, багатій або бідній тромбоцитами за допомогою фазово- контрастного мікроскопування.[12,14].

2.2.1.Визначення кількості тромбоцитів

Підрвхунок тромбоцитів в камері Горяєва

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ

В серологічну пробірку наливаю 4 мл 1% розчину амонію оксалату,додаю до реактиву

0,02 мл крові капіляром Салі, ретельно змішую.Залишаю пробірку на 30 хв для гемолізу еритроцитів.Перемішую вміст пробірки та заповнюю камеру Горяєва , після чого залишаю камеру на 5 хв у вологу камеру (чашка Петрі з вологою ватою або фільтрувальним папером);

Підраховую кількість тромбоцитів за допомогою мікроскопа ( окуляр 7, об’єктив 40 ),підрахунок здійснюю у 25 великих квадратах сітки ,розподілених на 16 малих.Розраховую по формулі:

Х = ачб Ч 10 6/л ;

Де Х - кількість тромбоцитів в 1 мл крові; а- кількість тромбоцитів підрахованих у 25 великих квадратах; б - розведення крові( у 200) раз; в - кількість підрахованих мали квадратів (16х25=400); 400 - коефіціцєнт підрахунку до об’эму 1 мкм; 10 6/л перерахунок із мкл в л.

Скорочена формула має такий вигляд:

Х= а Ч 200 Ч 10 6/

НОРМА: 180- 320 Х 10 6/Л.[2,6,12].

ВИЗНАЧЕННЯ КІЛЬКОСТІ ТРОМБОЦИТІВ ЗА МЕТОДОМ ФОНІО

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ

В аглютинацій ну пробірку капіляром Панченко набираю

25 поділок 14% розчину магнію сульфату; всі ці реактиви запобігають агрегації тромбоцитів, що дає змогу підрахувати їх у мазках крові.

В пробірку наливаю 4 мл 0,9% розчину NaCl ( для визначення кількості еритроцитів).

Додаю в пробірку 10 подылок кровы капіляром Панченко. А в другу пробірку 0,02 мдл крові капіляром Салі, ретельно перемішуємо вміст пробірки.

Підраховую кількість еритроцитів за допомогою камери Горяєва, із суміші із першої пробірки