Мазки досліджую під мікроскопом під імерсійною системою, підраховую кількість тромбоц2итів ,що зустрічаються на 1000 еритроцитів( тромбоцити мають вигляд маленьких утворень розміром 3-4 мкм .рожево-фіолетового кольору).

Під час підрахунку тромбоцитів я користуюся обмежувачем поля зору ( віконечко Фоніо).

Підрвхунок здійснюю наступним чином :

Підраховую 1000 еритроцитів і одночасно тромбоцити, що зустрічаються.[2,5,9].

2.2.2. ДОСЛІДЖЕННЯ АДГЕЗИВНОСТІ ТРОМБОЦИТІВ

Беру пробу крові для підрахунку тромбоцитів.Набираю в шприц 2 мл крові, приєднюю до нього колонку з скляними шариками і вставляю шприц в інфузійний насос.Включаю насос і пропускаю через колонку за 1 хв.Виттікаючу із колонки кров збираю впробірку і знову беру пробу для підрахунку тромбоцитів.Індекс адгезивності тромбоцитів підраховую по формулі :

ІГ = АчВ Ч 100% , де А - кількість тромбоцитів в крові до пропускання , В - кільк4ість тромбоцитів в крові після пропускання через колонку.Норма: 20-50%.[4,]

2.2.3.ДОСЛІДЖЕННЯ АГРЕГАЦІЙНОЇ ФУНУЦІЇ ТРОМБОЦИТІВ.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ: набираю в пробірку 0,2мл плазми і ставлю на водяну баню при 37°С .Через 1 хв добавляю 0,1 мл розчину АДФ і зразу ж включаю секундомір.Пробірку легенько взбовтую , і спостерігаю утворення в суміші великих агрегатів тромбоцитів.[2]

Норма : 10-60 сек .

2.3.Дослідження коагуляційного гемостазу.

До найчастіше застосованих методик належить визначення часу зсідання крові.Описано багато методів, однак найбільш відповідає фізіологічним умовам і найбільш прийнятий уніфікований метод часу зсідання крові по Лі-Уайту ( норма 3-5хв).Цей метод характеризує загальну коагуляційну активність крові.Прискорення часу зсідання крові спостерігається при підвищенній коагуляцій ній активності, що буває при ряді патологічних процесів (післяродовий період , обширні операції, численні опіки , переломи).

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ

Набираю 1 мл крові з вени вмикаю секундомір,переношу кров до сухої чистої пробірки і ставлю на водяну баню при температурі 37°С,через дві хв. ,а потім через кожні 30 сек.прообірку нахиляю в один бік приблизно на 45-50°С, фіксують за стікати по пробірці й утвориться згусток.[11,18].

НОРМА: час звертання венозної крові від 5 до 10 хв.

2.3.1.Визначення активованогоо часу рекальцифікації плазми.

ПРИНЦИП : визначення часу згортання багатої тромбоцитами плазми при додаванні оптимальної кількості кальція в умовах стандартизації каоліном контактної фази процесу згортання.

РЕАКТИВИ : 1. Хлористий кальцій 0,025М.

2. Суспензія каоліну 0,5 %.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ. Досліджують багату на тромбоцити плазму.В пробірку з 0,1 мл плазми добавляю 0,1 мл суспензії каоліна. Енергійно взбовтую і інкубую 5 хв ( час який необхідний для повної активації факторів контакту ) при 37 ° С в водяномпу тармостаті. Через 5 хв дожаю 0,2 мл напередодні розігрітого до 37°С 0,025м.Відмічаю час утворення згустку.Визначення проводжу в параллелях і беру середній результат.[12,14].

НОРМАЛЬНІ ВЕЛИЧИНИ. 50 - 70 сек.

2.2.2.Визначення тромбопластину.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ.

Складаю 5 рядів пробірок з сумішами:

У всі ряди даю адсорбовану плазму хворого і виворотку здорового.

1 – й ряд – плазмовий; 2- й ряд – сиворотковий; 3-й ряд – плазмово – сиворотковий; 4-й ряд – тромбоцитарний ; 5-й ряд- контрольний.Тестування всіх рядів проврдиться однаково. Починаючи з контрольного ряду.В 5-6 пробірок розливаю по 0,1 мл розчину хлориду кальцію і ставлю на водяну баню.Туди ж ставлю пробірки з 0,6-0,8 мл субстрату плазми. В нову пробірку наливаю 0,2 мл нормальной суспензії тромбоцитів. Компоненти змішую і ставлю на водяну баню,додавши 0,2 мл хлориду кальцію. Включаю секундомір.Через 2хв переношу 0,1мл суміші в одну ізх пробірок яка мстить 0,1мл розчину хлориду кальцію і додаю 0,1 мл прогрітої субстратної плазми.В момент додавання включаю другий секундомір і відмічаю час утворення згустку.Дослідження проводжу через 4,6,8,10,12хв інкубації суміші.[11,17]

НОРМАЛЬНІ ВЕЛИЧИНИ:7-11 сек.Реєструю на 4-й або 6-й хв інкубації.

2.3.3.Визначення протромбінового часу.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ.

Впробірку наливаю 0,1 мл плазми донора і 0,1мл розчину тромбопластину і ставлю пробірку на водяну баню.Через 1хв додаю 0,1 мл розчину хлориду кальцію, включаю секундомір і відзначаю час утворення згустку,дослідження повторюю і вираховую сер.значення.Так само і відзначаю час згортання досліджуваної плазми.

НОРМА:12-20 сек (в залежносты від активності тромбопластину ).[1,3].

2.3.4.Визначення тромбінового часу.

Реактиви: 1.0,9 % NaCl.

2. Розчин тромбіну,який згортає плазму здорової людини за 14-16 сек.[1,3].

Хід визначення.

Додаю в пробірку 0,1мл досліджуваної плазми і 0,1 мл NaCl, ставлю в термостат при 37°С.На 10-й сек. Інкубації додаю 0,1 мл ролзчину тромбыну і відмічаю час утворення згустку.Визначення проводжу 2-3 рази і беру сер. Результат.

Норма: 14-16 секунд.

Замітка. 1.Розчин тромбіну слід готувати силіконовій посуді або поліетиленових пробірках.так як в звичайній скляній пробірці тромбін адсорбується і швидко інактивується.

2.Готувати робочий розчин тромбіну безпосередньо передж роботою, не більш як за 30хв до роботи.

3.Концентрація тромбіна підбирається для кожної нової серії препарата дослідним шляхом,по змішаній донорській плазмі,підганяя активність в тромбіновий час для цієї плазмит 14-16 сек.

4.Результати дослідження більш стабільні, якщо використовувати безтромбоцитарну цитратну плазму.

2.3.5.Кількісне визначення фібриногену (фактор І ).

Хід визначення.

Набираю в пробірку 1 мл плазми, додаю до неї 0,2мл розчину тромбіну, і зразу ж опускаю в пробірку склянну паличку.Включаю секундомір і ставлю пробірку на водяну баню.Фібрин, який утворився намотую на паличку і витягую через 10хв.Згусток переношу на фільтрувальний папір і зважую на торсійній вазі.[5,`19]

Норма : 10-51сек.

2.3.6.ТОКОАГУЛЯЦІЙНИЙ ТЕСТ

ПРИНЦИП МЕТОДУ :аутрокоагуляційний тест (АКТ) – забезпечує дослідження гемостазу в умовах стандартизації фосфоліпідної та контактної активації початкової фази процесу згортання крові за рахунок використання еритроцитів хворого. Реактиви :1.3,8 розчин цитрату натрію.

2.0,025 М розчин хлорида кальція.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ : із венозної крові змішаної з цитратом натрія

В співвідношенні 9:1 відбирають 0,3-0,5 мл в окрему пробірку для приготування гемолізат- кальцієвої суміші.Кров яка залишилася відцентрифуговують