НОРМАЛЬНІ ВЕЛИЧИНИ:7-11 сек.Реєструю на 4-й або 6-й хв інкубації[12].

2.3.3.Визначення протромбінового часу.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ:

Впробірку наливаю 0,1 мл плазми донора і 0,1мл розчину тромбопластину і ставлю пробірку на водяну баню.Через 1хв додаю 0,1 мл розчину хлориду кальцію, включаю секундомір і відзначаю час утворення згустку,дослідження повторюю і вираховую сер.значення.Так само і відзначаю час згортання досліджуваної плазми.

НОРМА:12-20 сек (в залежносты від активності тромбопластину ) [4-9].

2.3.4.Визначення тромбінового часу.

Реактиви: 1.0,9 % NaCl.

2. Розчин тромбіну,який згортає плазму здорової людини за 14-16 сек.

Хід визначення.

Додаю в пробірку 0,1мл досліджуваної плазми і 0,1 мл NaCl, ставлю в термостат при 37°С.На 10-й сек. Інкубації додаю 0,1 мл ролзчину тромбыну і відмічаю час утворення згустку.Визначення проводжу 2-3 рази і беру сер. Результат.

Норма: 14-16 секунд.

Замітка. 1.Розчин тромбіну слід готувати силіконовій посуді або поліетиленових пробірках.так як в звичайній скляній пробірці тромбін адсорбується і швидко інактивується.

2.Готувати робочий розчин тромбіну безпосередньо передж роботою, не більш як за 30хв до роботи.

3.Концентрація тромбіна підбирається для кожної нової серії препарата дослідним шляхом,по змішаній донорській плазмі,підганяя активність в тромбіновий час для цієї плазмит 14-16 сек.

4.Результати дослідження більш стабільні, якщо використовувати безтромбоцитарну цитратну плазму[5,12,16].

2.3.5.Кількісне визначення фібриногену (фактор І ).

Хід визначення.

Набираю в пробірку 1 мл плазми, додаю до неї 0,2мл розчину тромбіну, і зразу ж опускаю в пробірку склянну паличку.Включаю секундомір і ставлю пробірку на водяну баню.Фібрин, який утворився намотую на паличку і витягую через 10хв.Згусток переношу на фільтрувальний папір і зважую на торсійній вазі [5,9,20].

Норма: 200-400мг/ % [5].

2.3.6.АУТОКОАГУЛЯЦІЙНИЙ ТЕСТ

ПРИНЦИП МЕТОДУ : аутрокоагуляційний тест (АКТ) – забезпечує дослідження гемостазу в умовах стандартизації фосфоліпідної та контактної активації початкової фази процесу згортання крові за рахунок використання еритроцитів хворого. Реактиви :1.3,8 розчин цитрату натрію.

2.0,025 М розчин хлорида кальція.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ : із венозної крові змішаної з цитратом натрія

В співвідношенні 9:1 відбирають 0,3-0,5 мл в окрему пробірку для приготування гемолізат- кальцієвої суміші.Кров яка залишилася відцентрифуговують при 1500 об/ хв. 10хв для отримання плазми.Плазму розводять по0,1 мл в 10 центрифужних пробірок і ставлю в водяну баню (37°С).В окрему пробірку набираю 2 мл розчину хлориду кальцію , потім в неї додаю 0,1 мл приготовленої крові яку я залишила для приготування суміші, і зразу ж включаю секундомір.Пробірку з цією сумішшю взбовтую і ставлю в водяну баню.Потім в кожну із прбірорк додаю цю суміш по 0,1 мл послідовно : через 2,4,8,10,20,30,40,50,60 хв від моменту приготування цієї суміші.В кожній пробірці визначаю час згортання плазми .По автокоагулограмі визначаю наступні параметри:згортання на 2 хв, згортання максимальне ,індекс інактивації тромбопластина і тромбіна [5,8].

НОРМА: НА 2 ХВ 17-50 сек.,на 4 хв 8-25 сек., на 8 хв 7-11 сек.,

На 10- 7-10 сек.,на 20 – 7-14, на 30 – 10-18 , на 40 – 10-22, на 50- 12-25 , на 60 – 12-32 сек.

2.3.8.КОАЛІНОВИЙ ЧАС

Принцип : визначаю час згортання багатої тромбоцитами плазми при додаванні оптимальної кількості кальція в умовах стандартизації коаліном контактної фази процесу згортання.

Реактиви :

1.Хлористий кальцый 0,025 М.

2.Суспензыя коаліна , 0,5%.

ХІД ВИЗНАЧЕННЯ .Досліджую багату тромбоцитами плазму.В пробірку з 0,1 мл плазми додаю 0,1 мл суспензії коаліна,енергійно взбовтую і інкубую ротягом 5 хв при 37 ° С в водяному термостаті .Через 5 хв додаю 0.2 мл попередньо підігрітого до 37 ° С 0,025М розчину хлориду кальціюі одночасно включаю секундомір .Відмічаю утворення кров’яного згустку.Визначення проводжу параллельно і беру середній результат.

Норма:50-70 сек. [14,15,17].

2.4.ФАЗИ ЗГОРТАННЯ КРОВІ.

Суть процесу згортання крові в загальних рисах можна представити наступним чином:під дією будь якого агента утвориться активний кров’яний тромбопластин , який переводить протромбін у активну форму – тромбін.Той в свою чергу взаємодіє на фібриноген, перетворюючи його в нерозчинний фібрин,який випадає з кров’яного русла в вигляді тромбу.Якщо подивитися на вище написану схему , то необхідно зазначити ,що ввесь процес згортання крові ділиться на чотири фази :

Перша фаза – протромбіноутворення ;

Друга фаза – тромбіноутворення ;

Третя фаза – фібриноутворення ;

Четверта фаза – посткоагуляційна.

Перша фаза найбільш триваліша від інших в процесі згортання крові.Вона займає 4-6 хв.Реакції, характерні для цієї фази, можуть розвиватися як по внутрішньому механізму так і по зовнішньому. В першому випадку процес розпочинається з ХІІ фактора ( пошкоджена судинна стінка,імунні комплекси, хіломікрони) і ін..).Потім проходить лінійна реакція, в якій бере участькалікреін, кінін і ряд факторів ,формуючих 1 і 2 з акетивацыэю фактора Х ( див. таб. №2).При цьому утворюється комплекс 3 із факторів Ха,\/3,І\/, здатен перетворити протромбін в тромбін.Тому даний комплекс , якому приписуэться ферментна активнысть, по аналогыъ з ферментами названий протромбіназою[17,18].

Зовнішній механізм утворення активної протромбінази починається з появою в кров’яному руслі фактора ІІІ ( тканинний тромбопластин ),який поступає із пошкодженних тканин ,а нормальних умовах відсутній в плазмі крові.Комплекс факторів ІІІ,\/ІІа,І\/, також здатний активувати фактор Х, формуючи протромбіназний комплекс.Кожний із приведених механізмів утворення протромбінази проходить паралельно.З утворенням протромбінази завершується перша фаза згортання крові[6].

В другій фазі проходить утворення тромбіну. ( ІІа) із його активного попередника - протромбіна (ІІ) під дяєю протромбінази.Фаза швидкотривала.На неї йде 2-5 секунд.

В ході третьої фази тромбін відщеплюється від фібриногена пептиди А і В,перевівши його в фібрин- мономер.Послідній ,полімеризуючись, випадає із плазми у вигляді безколірних ниток фібрину.Тому фібриновий згусток завжи забарвлений у червоний колір за рахунок еритроцитів.На нього діє ХІІІ фактор (фібриназа) [3,7,17].

Активація