ТАВРІЙСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

ім. В.І. ВЕРНАДСЬКОГО

ЯХ’Я БАККАР

УДК 577.151:577.122

АКТИВНІСТЬ АМІНОТРАНСФЕРАЗ, ФОСФАТАЗ І ДЕЯКИХ ОКСИДАЗ КРОВІ У ДИНАМІЦІ ДІЇ НОВИХ ПОХІДНИХ ОКСАНІЛОВОЇ КИСЛОТИ

03.00.04. – біохімія

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата біологічних наук

Сімферополь-2003

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана в Харківській медичній академії післядипломної освіти МОЗ України

Науковий керівник: - доктор медичних наук, професор Ткач Юрій Іванович, Харківська медична академія післядипломної освіти, завідувач кафедри клінічної лабораторної діагностики

Офіційні опоненти:- доктор біологічних наук, професор Коношенко Світлана Володимирівна, Таврійській національний університет ім. В.І. Вернадського, завідувач кафедри біохімії

- доктор біологічних наук і доктор медичних наук, професор Жуков Віктор Іванович, Харківський державний медичний університет, завідувач кафедри біохімії

Провідна установа: Харківський національний університет ім. В.Н. Каразіна, кафедра біохімії

Захист відбудеться “04” червня 2003р. о 1400 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради -К 52.051.04 в Таврійському національному університеті ім. В.І. Вернадського, за адресою: вул. Ялтінська, 4, 95007, м. Сімферополь.

З дисертацією можна ознайомитись у науковій бібліотеці Таврійського національного університету ім. В.І. Вернадського, за адресою: вул. Ялтінська, 4, 95007, м. Сімферополь.

Автореферат розісланий 30.04.2003 р.

Вчений секретар

Спеціалізованої вченої ради -К 52.051.04 В.С. Мартинюк

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. Ферментативні системи клітин (оксидоредуктази, трансферази, гідролази і ін.), які каталізують ключові реакції клітинного метаболізму і локалізовані в органелах, цитозолі і на плазмолемах, завжди чутливо реагують при дії екстремальних факторів на організм. Еквівалентна рівновага між кількістю молекул ферментів у плазмі крові і у клітинах органів, існуюча в нормі (Березин І.В. і ін., 1990; Кононський О.І., 1994; Кучеренко М.Є. і ін., 1995; Вороніна Л.Н. і ін.., 1999), завжди швидко змінюється при впливі хімічних, фізичних чи біологічних стресових факторів. Оскільки при стресі в клітинах органів сповільнюються процеси окислювального фосфорилювання, активується ПОЛ, прискорюється синтез деяких білків і ферментів, знижується синтез альбуміну, збільшується проникливість клітинних мембран, відбувається деструкція органел і цитозолю, виникає некротичний процес, то в плазму крові поступають у збільшеній кількості молекули ферментів, гострофазних білків, амінів, ліпідів, вуглеводів (Бишевський А.М. і ін. 1994; Долгов В.В. і ін., 1995; Меньшиков В.В., 1997; Камишніков В.С., 2000). Тому показники ферментів і інших сполук крові є надійними критеріями при дослідженні впливу нових синтетичних речовин на організм тварин.

При токсичних і запальних пошкодженнях клітин органів, при перебудові внутрішньоклітинних мембран амінотрансферази, які приймають участь в обміні амінокислот, у відносно великій кількості поступають у плазму крові (Золотавина М.Л. і ін. 1997; Lustig V. et.al., 1988). Підвищення активності АлАТ і АсАТ в 2-5 разів у сироватці крові щурів реєструється після введення їм ацетамінофенону чи ізоніазіду в токсичних дозах (Коваленко В.М. і ін. 2001).

У щурів при аутоімунному гломерулонефриті у сироватці крові і в тканинах нирок підвищується активність АлАТ і АсАТ(Козар В.В., 2000). При моделюванні жовчнокам’яної хвороби з холестазом у щурів у сироватці крові збільшуються активності ЛФ, глутаматдегідрогенази і -глутамілтрансферази (Putzki H. et.al. 1989). Але у плазмі крові голодаючих щурів відмічається зниження активності ЛФ, а відновлення її до норми відбувається тільки через 5 діб після закінчення голодування (Minotti G. et.al. 1987).

При емоційно-больовому стресі у щурів через добу у сироватці крові збільшуються концентрації ДК, лугів Шіффа, ТБК-активних продуктів, вітаміну Е, активності СОД і глутатіонпероксідази, а у морських свинок в аналогічних умовах реєструється підвищення у сироватці крові вмісту ДК, лугів Шіффа і ТБК-активних продуктів, але є зниження концентрації вітаміну Е, активності СОД і глутатіонпероксідази (Вилков Г.А. і ін., 1993).

Таким чином, відносна стабільність процесів обміну ферментів і інших сполук в нормі, швидка мінливість їх при дії хімічних і інших факторів на організм можуть бути використані при випробовуванні нових хімічних антизапальних, антиоксидантних речовин.

Відомо, що процеси обміну ферментів і різних метаболітів, які змінюються при запаленнях органів, підлягають регуляції з нормалізацією, якщо в якості ліків використовуються нестероїдні протизапальні засоби. Саліцилати, похідні індолоцтової кислоти, комплексні і інші засоби пригнічують ексудацію і втрати білків, гіпертермію і втрати енергії, зменшують утворення грануляційної тканини, знижують активність циклооксігенази, гіалуронідази, лізосомальних гідролаз і інших ферментів, пригнічують синтез гістаміну, серотоніну, тромбоксану, простагландінів. Але ці ліки не впливають на процеси альтерації, а у деяких пацієнтів викликають ускладнення: ульцерогенні, нейротоксичні, гепатотоксичні, нефротоксичні, алергічні, кардіотоксичні і інші (Машковский М.Д., 1993; Крилов Ю.Ф., 1999; Коваленко В.М. і ін. 2000). Таким чином, пошук нових синтетичних нестероїдних протизапальних засобів з меншими токсичними властивостями є актуальним.

Зв’зок роботи з науковими програмами, планами, темами. У зв’язку з цим у ХМАПО хіміками були синтезовані дві нові похідні оксанілової кислоти (УОК, У-4-ХОК) (Петюнін Г.П. і ін., 1997) з передбачуваними цілющими властивостями, вплив яких на ферментативні процеси у тварин в нормі і при дії стресових факторів був невідомий. Все це стало основою для проведення цієї роботи, а виконані дослідження мають дуже тісний зв’язок з науково-дослідними роботами у ХМАПО (Держреєстрація №01890011484).

Мета і задачі дослідження. Встановити ефективність дії нових синтетичних похідних оксанілової кислоти (УОК і У-4-ХОК) у динаміці на активність амінотрансфераз, фосфатаз, оксидаз і на вміст деяких сполук в крові у щурів в нормі і при гострому запаленні з оксидантним стресом.

Задачі роботи:

1.

2.

3.

Об’єкт дослідження. Процеси проміжного обміну речовин з участю деяких оксидаз, амінотрансфераз, фосфатаз і деяких інших ферментів у щурів в нормі і при гострому запаленні з оксидантним стресом.

Предмет дослідження. Вплив нових синтетичних похідних оксанілової кислоти на активність деяких оксидаз, амінотрансфераз, фосфатаз і на вміст деяких сполук у крові при різних станах організму щурів у динаміці.

Методи дослідження. Біохімічні (визначення у сироватці крові активності ферментів і концентрацій інших сполук), статистичні (обробка результатів за біологічною статистикою).

Наукова новизна одержаних результатів. Вперше встановлено, що активність оксидаз (СОД, каталази), амінотрансфераз (АлАТ, АсАТ), фосфатаз (ЛФ, КФ), а також вміст у сироватці крові сполук ліпідів, продуктів ПОЛ, амінів, гострофазних білків не порушуються у здорових щурів у динаміці після введення у шлунок УОК і У-4-ХОК в дозах 50 мг/кг і 100 мг/кг, що свідчить про відносну нешкідливість і низьку токсичність нових синтетичних речовин.

Вперше встановлено, що УОК і У-4-ХОК сприяють зниженню у динаміці активності ферментів, вмісту ліпідів, амінів, гострофазних білків, продуктів ПОЛ у щурів при гострому запаленні з оксидантним стресом, що підтверджує наявність у нових речовин антиоксидантних і антизапальних властивостей.

Вперше у УОК і У-4-ХОК при комп’ютерному дослідженні передбачені антизапальна (підтверджена в експериментах) і ще по два десятки інших активностей, які можуть проявлятися при введенні цих речовин тваринам і людям.

Практичне значення одержаних результатів. Вперше доказані антизапальні і антиоксидантні властивості УОК і У-4-ХОК є експериментальним обгрунтуванням для майбутніх досліджень по вивченню їх ефективності при дії різних стресових факторів на тварин, з метою розробки нових антистресових засобів.

Показники процесів обміну внутрішньоклітинних ферментів, ліпідів,білків, амінів, продуктів ПОЛ, які визначали у сироватці щурів після введення у шлунок УОК, У-4-ХОК і інших речовин, можуть бути використані як порівняльні дані при проведенні експериментальних, учбових і науково-практичних досліджень.

Особистий внесок дисертанта. Автор самостійно виконав експерименти на щурах, взяття крові, підготовку її до біохімічних досліджень і визначення показників обміну внутрішньоклітинних ферментів, гострофазних білків, ліпідів, амінів, ПОЛ і АОС, статистичну обробку одержаних результатів, пошук і реферування джерел літератури, написання статей і розділів дисертації.

Апробація результатів дисертації. Результати дисертаційної роботи обговорювались на науково-практичній конференції молодих вчених ХМАПО (Харків, 1999), міжнародному науково-практичному семінарі по створенню і апробації нових лікарських засобів (Бєлгород, 1999), на засіданнях кафедр клінічної лабораторної діагностики, клінічної біохімії і судово-медичної токсикології ХМАПО, кафедри біохімії Харківського національного університету ім. В.Н. Каразіна.

Публікації по темі дисертації. По темі дисертації опубліковано 9 робіт, з яких 5 статей в журналах, 4 – в збірниках наукових праць і матеріалах конференцій, 5 робіт без співавторів.

Обсяг і структура дисертації. Дисертація викладена на 145 сторінках машинописного тексту, має 47 таблиць (в додатках), 18 малюнків і складається із вступу, огляду літератури, опису методів досліджень, викладення отриманих результатів і їх обговорення, заключення, висновків, списку використаних джерел інформації, який містить 279 джерел, з яких 49 іноземних авторів.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ.

Огляд літератури. У цьому розділі проаналізовані сучасні опубліковані дані про процеси обміну амінотрансфераз, фосфатаз, ферментів АОС і інших сполук у людей і тварин в нормі і в динаміці адаптації організму при різних стресових ситуаціях. Дані літератури свідчать про те, що інтенсивність обміну ферментів і інших сполук змінюється закономірно при дії хімічних, фізичних і біологічних стресових факторів, а тому показники цих біохімічних процесів в крові можуть бути об’єктивними критеріями при впливі нових синтетичних речовин УОК і У-4-ХОК на щурів.

Методи досліджень. Виконуючи дисертацію, було здійснено пошук структурних аналогів УОК і У-4-ХОК з допомогою комп’ютерної програми “Chembase” (Martin Neqwer, 1987). Комп’ютерну програму “ОРАКУЛ” (оптимізований розпізнаючий алгоритм конструювання удосконалених ліків), функціонуючу на основі різновиду алгоритму по логіко-структурних закономірностях, приміняли для передбачення біологічних активностей УОК і У-4-ХОК (Розенблит А.Б., Голендер В.Е., 1983).

Експерименти були проведені на 225 щурах-самцях масою 180-230 г популяції Вістар (табл. 1). Всі біохімічні дослідження виконувались в осінньо-зимовий період у ранкові години у відповідності з “Правилами використання лабораторних тварин” (1984, додаток 4) і Хельсинською декларацією про гуманне ставлення до тварин. УОК і У-4-ХОК (50 мг/кг і 100 мг/кг), вольтарен (25 мг/кг, речовина для порівняння) вводили тваринам у шлунок через рот з використанням зонду, через 1, 2, 3 і 4 години здійснювали під наркозом декапітацію і брали кров для досліджень. Гостре запалення з оксидантним стресом викликали 1% розчином карагеніну, 0,1 мл якого впорскували сублантарно в задню кінцівку (Яковлева Л.В., Зупанец И.А., 1987; Дроговоз С.М. и др., 1994). При дослідженні дії УОК і У-4-ХОК на процеси проміжного обміну внутрішньоклітинних ферментів визначали у сироватці активність АлАТ, АсАТ, ЛФ і КФ (Меньшиков В.В. 1987), СОД і каталази, вміст церулоплазміну, ВГ (Ивахненко А.К., 1998), гострофазних білків, фібриногену, церулоплазміну і загального білку (Іванов Е.П. 1983; Меньшиков В.В. 1987),

Таблиця 1.

Обсяг виконаних досліджень

№ | Назви фрагментів роботи | Кількість серій | Кількість тварин | Кількість вивчених показників

1 | 2 | 3 | 4 | 5

1. | Показники процесів обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС сироватки у інтактних щурів | 1 | 5 | 80

2. | Дія УОК на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у здорових щурів | 8 | 40 | 640

3. | Дія У-4-ХОК на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у здорових щурів | 8 | 40 | 640

Продовження табл. 1

1 | 2 | 3 | 4 | 5

4. | Дія вольтарену на процеси обміну білків, ферментів, амінів, ліпідів, ПОЛ і АОС у здоро вих щурів | 4 | 20 | 320

5. | Дія карагеніну на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у здорових щурів | 4 | 20 | 320

6. | Дія УОК і карагеніну на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у щурів | 8 | 40 | 640

7. | Дія У-4-ХОК і карагеніну на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у щурів | 8 | 40 | 640

8. | Дія вольтарену і карагеніну на процеси обміну ферментів, амінів, ліпідів, білків, ПОЛ і АОС у щурів | 4 | 20 | 320

Разом | 45 | 225 | 3600

медіаторів запалення – концентрації гістаміну і серотоніну (Колб В.Г., Камышников В.С., 1982, Камышников В.С. 2000) ліпідів-вміст загальних ліпідів і холестерину (Меньшиков В.В., 1987), ПОЛ-концентрації ДК і МДА. Всі результати, визначені в різних групах тварин, порівнювали між собою, приміняючи критерій Стьюдента з допомогою комп’ютерної програми (Минцер О.П. и др., 1991, Гланц С., 1998, Дягилева Ф.Г. и др., 1998, Лапач С.Н. и др. 2000).

Результати дослідження та їх обговорення. Результати, одержані в процесі дослідження, свідчать про те, що УОК і У-4-ХОК в середніх дозах практично не змінюють процеси обміну з участю внутрішньоклітинних ферментів, медіаторів запалення, білків, ліпідів, ПОЛ і АОС в динаміці у здорових щурів, але при гострому карагеніновому запаленні з оксидантним стресом позитивно впливають на досліджувані процеси метаболізму, проявляючи анти запальну і антиоксидантну властивісті.

При комп’ютерному дослідженні структурних формул нами було виявлено у УОК і У-4-ХОК цілий ряд спільних біологічних активностей, які з великою вірогідністю підтверджуються відносно великими коефіцієнтами довіри і ефективності прогнозу, антизапальну і ще по два десятки інших, які можуть проявлятися при введенні цих речовин тваринам чи людям. Антизапальні властивості УОК і У-4-ХОК нами вперше підтверджені в експериментах на щурах.

Дані, одержані при виконанні експериментів свідчать про те, що УОК і У-4-ХОК в дозах 50 мг/кг і 100 мг/кг при введенні здоровим щурам у шлунок через рот практично не впливають на процеси проміжного метаболізму в динаміці і тому у сироватці крові активність АлАТ, АсАТ, ЛФ і КФ, СОД, каталази, вміст фібриногену, церулоплазміну, загального білку, гістаміну, серотоніну, загальних ліпідів, холестерину, ВГ, ДК, МДА достовірно не відхиляються через 1, 2, 3 і 4 години від показників інтактних тварин (табл. 2).

Це співпадає з результатами, отриманими після введення вольтарену (речовини для порівняння), коли також в динаміці чотирьох годин у щурів не реєструвалось достовірних відхилень від норми показників процесів обміну ферментів, білків, амінів, ліпідів, ПОЛ і АОС, що давало підстави використовувати їх як порівняльні дані.

Але на відміну від приведених результатів, після ін’єкції карагеніну активність АлАТ, АсАТ, ЛФ і КФ, СОД і каталази, всі показники процесів проміжного обміну речовин, які досліджувалися, достовірно підвищувалися (з коливаннями в 1,1 - 2,3 рази) в динаміці в порівнянні з даними інтактних щурів. В процесі досліджень виявлялась тенденція зростання більшості показників у сироватці до третьої години, а через 4 години величини показників або залишалися такими, або спостерігалось їх незначне зниження в порівнянні з попередніми (табл. 3).

Одержані результати свідчать про те, що карагенін викликає в тканинах нижньої кінцівки альтерацію, вслід за якою виникає реакція судин з ексудацією, котрі спостерігаються на протязі чотирьох годин експериментів. Вплив карагеніну на метаболізм захоплює не тільки мале вогнище в тканинах нижньої кінцівки, але клітини і внутрішніх органів. Тому токсична дія карагеніну з альтерацією підтверджується проникненням з резервних клітин в плазму крові медіаторів запалення, в результаті чого у сироватці підвищується вміст гістаміну і серотоніну (а також інших медіаторів) на протязі чотирьох годин. Продукти альтерації приводять до виникнення “синдрому цитолізу” з частковим або повним порушенням мембран, мітохондрій, лізосом і ін., який підтверджується підвищенням у сироватці активності АлАТ, АсАТ, ЛФ, КФ, вмісту холестерину і загальних ліпідів. Вони викликають стимуляцію синтезу гострофазних протеїнів в гепатоцитах і в інших клітинах, про що свідчить збільшення у сироватці концентрацій

фібриногену, церулоплазміну, а з ними і загального білку. Паралельно проходить активація ПОЛ, з виникненням “оксидантного стресу”, з підвищенням у крові вмісту ДК і МДА, а як протидія – стимуляція АОС, що супроводжується зростанням ВГ і церулоплазміну, активності СОД і каталази.

Таким чином, токсична дія карагеніну з виникненням гострого експериментального асептичного запалення з оксидантним стресом в тканинах закономірно в динаміці змінює показники процесів обміну ферментів, білків, амінів, ліпідів, ПОЛ і АОС у крові, що використовувалось нами для виявлення антизапальних, антиоксидантних активностей УОК і У-4-ХОК.

Одержані нами результати узгоджуються з опублікованими даними про те, що токсична доза парацетамолу у щурів викликає у сироватці збільшення активності АлАТ і АсАТ, а в тканинах печінки зменшення вмісту цитохрому – 450, кількості білкових SH-груп і активності каталази (Сайфетдинова Г.А. и др. 2001) про те, що після введення щурам оцетамінофенолу і ізоніазиду в токсичних дозах у сироватці крові збільшується в 2-5 разів активність АлАТ і АсАТ (Коваленко В.М. 2001), а при аутоімунному гломерулонефриті – у сироватці крові і тканинах нирок щурів (Козар В.В., 2000), про підвищення активності АлАТ (в десятки разів) і АсАТ у сироватці хворих холестатичними формами гепатитів А і В на сьомий день жовтяниці, що свідчить про цитоліз гепатоцитів (Возианова Ж.И. 1990, 2000, Шкурба А.В. 1998), а також при алкогольному гепатиті (з переважанням збільшення АсАТ) і при вірусному гепатиті (з переважанням АлАТ) (Титов В.Н. 1990), при професійних токсичних гепатитах у робітників з інтоксикаціями чотирихлористим вуглецем, білим (жовтим) фосфором, тринітротолуолом (Макотченко В.М. и др, 1991, Карнаух Н.Г. и др. 1998), про збільшення активності АлАТ, АсАТ і ЛФ у сироватці ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС при хронічних неспецифічних запаленнях легень (Иванова Л.Н. 1997, 2000, Фролов В.М. и др. 1997), про зростання у сироватці активності ЛФ у хворих при хронічному активному гепатиті, вірусному гепатиті, холестазі, калькульозному холециститі (Громашевская Л.Л. 1990, 1991, Творогова М.Г. 1991, Радзевич И.М. и др. 1993, Иссельбахер К. и др. 1999), а також при ревматоїдному артриті і лікуванні хворих саліцилатами (Cimmino М.А. 1990, Творогова М.Г. 1991), про підвищення у сироватці хворих активності КФ при лихоманці і запаленнях нирок (Комаров Ф.И. и др. 1999), при простатиті (Минченко Б.И. и др. 1999).

УОК і У-4-ХОК в дозах 50 мг/кг і 100 мг/кг при введенні щурам з карагеніновим запаленням і оксидантним стресом благоприємно діяли на процеси метаболізму. УОК (100 мг/кг) через годину після ін’єкції карагеніну сприяв зниженню всіх показників сироватки, але достовірно тільки вмісту серотоніну в середньому на 10 % і активності КФ – на 8 %, через 2 години – концентрації гістаміну на 18 % і серотоніну – на 17 %, активності АлАТ – на 11 % і АсАТ – на 9,5 %, через 3 години - вмісту загального білку на 9%, загальних ліпідів – на 12%, холестерину – на 18 %, МДА – на 20% і ВГ – на 15 %, активності АлАТ – на 11 %, АсАТ – на 11,5 %, через 4 години - вмісту загального білку на 8 %, фібриногену на 12 %, загальних ліпідів – на 13 %, МДА – на 17 % і ВГ – на 12 %, активності АлАТ – на 11,5, АсАТ – на 12,3 %, ЛФ – на 13 % і каталази на 15,1 % (табл. 3).

У-4-ХОК (100 мг/кг) через годину виникнення запалення сприяла зниженню у сироватці всіх показників, які визначалися, але достовірно тільки вмісту загального білку в середньому на 9 %, гістаміну – на 17 %, серотоніну – на 20 %, загальних ліпідів – на 19 %, холестерину – на 21 %, активності АлАТ – на 22 %, КФ – на 21 % і СОД – на 19 %, через 2 години - концентрацій гістаміну – на 27 %, серотоніну – на 30 %, холестерину – на 31 %, ДК – на 35 % і МДА – на 33 %, активності АлАТ – на 18 %, АсАТ – на 21,5 % і КФ – на 17,5 %, через 3 години - вмісту загального білку на – 10,5 %, фібриногену – на 12 %, гістаміну – на 28 %, серотоніну – на 32 %, загальних ліпідів – на 21 %, холестерину – на 22 %, ДК – на 35 %, МДА – на 45 % і ВГ – на 15 %, активності АлАТ – на 21 %, АсАТ – на 23 %, СОД - на 20 % і каталази – на 25 %, через 4 години - концентрацій загального білку – на 11 %, фібриногену – на 19 %, загальних ліпідів – на 29 %, холестерину – на 31 %, МДА – на 30 % і ВГ – на 28 %, активності АлАТ – на 18, 5 %, АсАТ – на 19 %, ЛФ – на 20 %, КФ – на 20,5 % і каталази – на 15 % при порівнянні з впливом тільки карагеніну (табл. 3).

Таким чином, УОК і У-4-ХОК (50 мг/кг і 100 мг/кг) при введенні через рот у здорових білих щурів в динаміці практично не прискорюють процеси проміжного обміну з участю ферментів “синдрому цитолізу”, медіаторів запалення, гострофазних протеїнів, ліпідів і перекисного окислення ліпідів, не пригнічують антиоксидантні механізми, що підтверджує їх відносну нешкідливість і незначну токсичність.

УОК і У-4-ХОК в таких же дозах при введенні щурам, на яких діє карагенін, в динаміці сповільнюють процеси обміну з участю ферментів “синдрому цитолізу”, медіаторів запалення, гострофазних білків, ліпідів і перекисного окислення ліпідів, зберігають активність антиоксидантних реакцій, що свідчить про наявність у них антизапальних, антиоксидантних властивостей (підтверджуються зниженням вмісту ДК і МДА), котрі не більш ефективні, ніж у вольтарена, але м’якіші. Дози УОК і У-4-ХОК по 100 мг/кг мають більш виразні антизапальні активності при порівнянні з дозами по 50 мг/кг.

Отримані нами результати узгоджуються з опублікованими даними про те, що коли вводити карнозин щурам, у яких після гострої крововтрати у сироватці знижена активність СОД, підвищений вміст ДК і МДА, то ці показники наближаються до нормальних (Русаков В.В. и др. 1993), якщо вводити кверцетин щурам, у яких після хронічної дії епоксидної смоли ЕД-20 у крові підвищений вміст продуктів ПОЛ, то він знижується (Высоцкий И.Ю. и др. 2001), що коли вводити ролітетрациклін кролям, у яких при ішемії міокарду у сироватці крові і в тканинах серця підвищені концентрації тригліцеридів, фосфоліпідів і вільних жирних кислот, то ці показники зменшуються (Седлакова А. и др. 1993).

Можна припустити, що реакції антиоксидації УОК і У-4-ХОК можуть здійснюватись за рахунок участі рухливого атому водню з вільним радикалом, наприклад, з пероксидним аніоном – НОя2:

При подібних реакціях вільні кисневі радикали, які з’являються в надлишку при активації ПОЛ на мембранах клітин, заміняються на радикали нових похідних оксанілової кислоти, котрі, мабуть, не приймають активної участі в ланцюгових механізмах. Тому швидкість вільнорадикальних реакцій окислення зменшується, про що свідчить зниження у сироватці концентрацій ДК і МДА у щурів, на яких одночасно з карагеніном діяли УОК або У-4-ХОК. Можливо, УОК і У-4-ХОК, а також їх метаболіти утворюють антиоксидантні комплекси з природними антиоксидантами.

Виявлені в експериментах на щурах мінімально токсичний вплив УОК і У-4-ХОК на процеси проміжного обміну білків, ферментів, амінів, ліпідів, ПОЛ і АОС в нормі і благоприємна дія на процеси метаболізму при запальному оксидантному стресі показали можливість перспективних майбутніх досліджень по вивченню антизапальних, антиоксидантних активностей нових синтетичних речовин на різних моделях запалення (наприклад, які викликають бактерії, віруси, найпростіші та ін.) і тим самим сприяли появі нових пропозицій до примінення одержаних експериментальних результатів в нових практичних умовах.

ВИСНОВКИ

1. При виконанні дисертаційної роботи в експериментах на білих щурах з допомогою біохімічних досліджень у двох нових синтетичних похідних оксанілової кислоти вперше доведено відсутність значного впливу на процеси обміну внутрішньоклітинних ферментів і інших сполук у динаміці в нормі, а з допомогою комп’ютерних досліджень було передбачено наявність антизапальних активностей, які підтверджені експериментально і проявляються при дії у динаміці розвитку запалення . Виявлені властивості нових речовин можуть бути основою при розробці нових засобів.

2. Уреїд оксанілової кислоти і уреїд-4-хлороксанілова кислота (в дозах 50 мг/кг і 100 мг/кг) у здорових щурів у динаміці не пригнічують у сироватці активність супероксиддисмутази, каталази, аланінамінотрансферази, аспартатамінотрансферази, лужної фосфатази, кислої фосфатази, не змінюють вміст церулоплазміну і відновленого глутатіону, фібриногену і загального білку, гістаміну і серотоніну, холестерину і загальних ліпідів, дієнових кон’югатів і малонового діальдегіду, що підтверджує відносну нешкідливість і низьку токсичність нових речовин.

3. При дії карагеніну на здорових щурів у динаміці у сироватці крові підвищується активність амінотрансфераз, фосфатаз і антиоксидазних ферментів, вміст гострофазних білків, амінів, ліпідів і продуктів перекисного окислення ліпідів, що відповідає асептичному запаленню з оксидантним стресом.

4. Уреїд оксанілової кислоти і уреїд-4-хлороксанілова кислота в дозах 50 мг/кг і 100 мг/кг у щурів у динаміці на фоні дії карагеніну у сироватці знижують активність амінотрансфераз, фосфатаз і антиоксидазних ферментів, вміст гострофазних білків, амінів, ліпідів і продуктів окислення ліпідів, що підтверджує наявність антиоксидантних і антизапальних властивостей у нових речовин.

5. Вольтарен (25 мг/кг) на фоні дії карагеніну виявляє практично однаковий антиоксидантний і антизапальний ефект у вигляді нормалізації у сироватці крові у динаміці активності амінотрансфераз, фосфатаз і антиоксидазних ферментів, вмісту амінів, гострофазних білків, ліпідів і продуктів окислення ліпідів в порівнянні з більшими дозами уреїду оксанілової кислоти і уреїд-4-хлороксанілової кислоти, що підтверджує їх більш м’яку дію.

6. У уреїда оксанілової кислоти і уреїд-4-хлороксанілової кислоти з допомогою комп’ютерних програм “Chembase” і “ОРАКУЛ” на основі використання аналогів і логіко-структурних закономірностей передбачено антизапальну і по два десятки інших біологічних активностей. Антизапальні властивості нових речовин підтверджені в експериментах.

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Яхья Баккар. Противовоспалительная активность новых производных оксаниловой кислоты // Медицина сегодня и завтра. – 2000. - № 3 – с. 20-22.

2. Яхья Баккар. Изменения активности ферментов после введения новых производных оксаниловой кислоты у здорових крыс и при воспалении // Вісник проблем біології і медицини. – 2001 - № 6. – с. 7-10.

3. Яхья Баккар. Влияние новых производных оксаниловой кислоты на процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы при экспериментальном воспалении // Вісник проблем біології і медицини. 2001 - № 2. – с. 30-35.

4. Яхья Баккар. Показатели белкового и липидного обмена у здоровых крыс и при экспериментальном воспалении после введения новых производных оксаниловой кислоты // Вісник проблем біології і медицини. – 2002. - № 3. – с. 18-22.

5. Ткач Ю.И. Яхья Баккар. Динамика биохимических показателей сыворотки крови в норме, при воспалении и действии новых производных оксаниловой кислоты //Вісник проблем біології і медицини. – 2001 - № 4. – с. 104-110.

6. Ткач Ю.И., Яхья Баккар. Компьютерное исследование предполагаемой биологической активности новых производных оксаниловой кислоты // Оптимизация создания лекарств. препаратов. Сб. трудов междунар. научно-практич. семинара по созданию и апробации новых лекарств. Том Х. – Белгород. 1999. – с. 317-319.

7. Ткач Ю.И. Яхья Баккар. Антивоспалительная активность новых производных оксаниловой кислоты //Лекарства-человеку. – Том 12, № 1. Сб. научн. тр. – Харьков, 2000, - с. 232-235.

8. Ткач Ю.И. Яхья Баккар. Влияние новых производных оксаниловой кислоты на содержание аминов в сыворотке крови крыс // Лекарства – человеку. – Том 14 № 1. Мат. научн.-практ. Конф. – Харьков, 2001. – с. 213-217.

9. Яхья Баккар. Влияние новых производных оксаниловой кислоты на активность ферментов у здоровых крыс и при воспалении // Медицина на межі століть: Відкриття та перспективи. – Матер. наук. – практ. конф. молодих вчених ХМАПО. – Харків, 1999. – с. 134-136.

АНОТАЦІЇ

Ях’я Баккар. Активність амінотрансфераз, фосфатаз і деяких оксидаз крові у динаміці дії нових похідних оксанілової кислоти. Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за фахом 03.00.04 – біохімія. Таврійський національний університет ім. В.І. Вернадського, Сімферополь, 2003.

Дисертація присвячена визначенню ефективності впливу уреїду оксанілової кислоті (УОК), уреїд-4-хлороксанілової кислоти (У-4-ХОК) у динаміці на активність амінотрансфераз, фосфатаз, оксидаз і на вміст деяких сполук в крові білих щурів в нормі і при гострому запаленні з оксидантним стресом.

Встановлено, що УОК і У-4-ХОК при введенні у шлунок в дозах 50мг/кг і 100 мг/кг здоровим щурам у динаміці чотирьох годин не прискорюють процеси обміну з участю внутрішньоклітинних ферментів, гострофазних протеїнів, амінів, ліпідів і перекисного окислення ліпідів, не пригнічують антиоксидантну систему, а при гострому карагеніновому запаленні з оксидантним стресом проявляють анти запальні і антиоксидантні властивості, коли у динаміці сприяють зниженню у сироватці крові показників аланінамінотрансферази, аспартатамінотрансферази, лужної фосфатази, кислої фосфатази, супероксиддисмутази, каталази, гістаміну, серотоніну, загального білку, фібриногену, церулоплазміну, загальних ліпідів, холестерину, дієнових кон’югатів, малонового діальдегіду і відновленого глутатіону.

Ключові слова: уреїд оксанілової кислоти, уреїд-4-хлороксанілова кислота, активність амінотрансфераз, фосфатаз і оксидаз, гостре карагенінове запалення з оксидантним стресом.

Яхья Баккар. Активность аминотрансфераз, фосфатаз и некоторых оксидаз крови в динамике действия новых производных оксаниловой кислоты. Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.04 – биохимия. Таврийский национальный университет им. В.И. Вернадского, Симферополь, 2003.

Диссертация посвящена определению эффективности влияния уреида оксаниловой кислоты (УОК) и уреид-4-хлороксаниловой кислоты (У-4-ХОК) в динамике на активность оксидаз, аминотрансфераз, фосфатаз и на содержание некоторых соединений в крови у белых крыс в норме и при остром воспалении с оксидантным стрессом.

Для достижения цели работы были проведены эксперименты на 225 белых крысах-самцах массой 180-230 г популяции Вистар, разделенных на 45 серий. УОК и У-4-ХОК в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг, вольтарен (25 мг/кг, лекарство для сравнения) вводили крысам в желудок через рот зондом и через 1, 2, 3 и 4 часа осуществляли под наркозом декапитацию и забирали кровь для биохимических исследований. Острое воспаление вызывали 1% водным раствором каррагенина, 0,1 мл которого инъецировали субплантарно в заднюю конечность.

При исследовании влияния УОК и У-4-ХОК на ферментативные процессы в сыворотке крови определяли активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы, супероксиддисмутазы и каталазы, концентрации общих липидов, холестерина, общего белка, фибриногена, церулоплазмина, гистамина, серотонина, восстановленного глутатиона, диеновых конъюгатов, малонового диальдегида.

Впервые установлено, что активность аминотрансфераз, фосфатаз, оксидаз, а также содержание в сыворотке крови соединений липидов, продуктов перекисного окисления липидов, аминов, острофазных белков не нарушаются у здоровых крыс в динамике после введения в желудок УОК и У-4-ХОК в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг, что свидетельствует об относительной безвредности и низкой токсичности новых синтетических веществ.

Впервые установлено, что УОК и У-4-ХОК способствуют снижению в динамике активности ферментов, содержания липидов, аминов, острофазных белков, продуктов ПОЛ у крыс при остром воспалении с оксидантным стрессом, что подтверждает наличие у новых веществ антиоксидантних и антивоспалительных свойств.

Впервые у УОК и У-4-ХОК при компьютерном исследовании предсказаны антивоспалительная (подтверждена в экспериментах) и еще по два десятка других активностей, которые могут проявиться при введении этих веществ животным и людям.

Ключевые слова: уреид оксаниловой кислоты, уреид-4-хлороксаниловая кислота, активность аминотрансфераз, фосфатаз и оксидаз, острое каррагениновое воспаление с оксидантным стрессом.

Yahia Bakkar. Activity of the blood aminotransferases, phosphatases and some oxidases in dynamics of new derivatives of oxanyl acid effect - Manuscript.

Dissertation for a Candidate's of Biological Sciences degree by speciality 03.00.04. - biochemistry. - National V. I. Vernadski Tavricheskiy University, - Simfer2003.

The dissertation deals with determination of efficiency of the oxanyl acid ureid (UOA) and ureid-4-chloroxanyl acid (U-4-COA) in dynamics influencing on the activity of aminotransferases, phosphatases, oxidases and on the contents of some compounds in blood of white rats normally and at acute inflammation with oxidative stress.

We have established that UOA and U4COA injected into healthy rats stomin dosages of 50 and 100 mg/kg within 4 hours show no acceleration of meof intracellular enzymes, acute phase proteins, amines, lipids and lipid peroxidation, no depression of antioxidative system; at acute carragenine inflamation with oxidative stress demonstrate antiinflammatory, antioxidation properties influencing in dynamics on the decreasing in blood serum the indices of alaninaminotranspherase, aspartataminotranspherase, alkali phosphatase, acid phosphatase, superoxiddysmutase, catalase, histamine, serotonin, total proteins, fibrinogen, ceruloplasmin, total lipids, cholesterol, deine conjugates, malone dialdehyde and reduced glutation.

Key words: oxanyl acid ureid, ureid-4-chloroxanyl acid, activity of amiphosphates, oxidases, acute carragenine inflammation with oxidastress.

Перелік умовних позначень

АлАТ – аланінамінотрансфераза

АОС – антиоксидантна система

АсАт – аспартатамінотрансфераза

ВГ – відновлений глутатіон

ДК – дієнові кон’югати

КФ – кисла фосфатаза

ЛФ - лужна фосфатаза

МДА – малоновий діальдегід

ПОЛ – перекисне окислення ліпідів

СОД – супероксиддисмутаза

УОК – уреїд оксанілової кислоти

У-4-ХОК-уреїд-4-хлороксанілова кислота

ХМАПО – Харківська медична академія післядипломної освіти

Автореферат

Підп. до друку 30.04.2003р. Формат 60х84 1/16. Папір офсетний.

Друк - різографія. Обсяг 0,8 друк. Арк. Тираж 100 прим. Зам. № б/н

СПД ФЛ Степанов В.В. 61168, Харків, вул. Ак. Павлова 311